Các bài viết liên quan
- KỸ THUẬT KHỐI TẾ BÀO BỆNH PHẨM CHỌC HÚT KIM NHỎ
- KỸ THUẬT KHỐI TẾ BÀO DỊCH CÁC KHOANG CƠ THỂ
- KỸ THUẬT TẾ BÀO HỌC DỊCH CÁC TỔN THƯƠNG DẠNG U NANG
- KỸ THUẬT TẾ BÀO HỌC DỊCH KHỚP
- KỸ THUẬT TẾ BÀO HỌC DỊCH RỬA Ổ BỤNG
- KỸ THUẬT TẾ BÀO HỌC DỊCH CHẢI PHẾ QUẢN
- KỸ THUẬT TẾ BÀO HỌC DỊCH RỬA VÀ HÚT PHẾ QUẢN
- KỸ THUẬT TẾ BÀO HỌC ĐỜM
- KỸ THUẬT TẾ BÀO HỌC NƯỚC TIỂU
- KỸ THUẬT TẾ BÀO HỌC BONG CÁC DỊCH MÀNG BỤNG, MÀNG PHỔI, MÀNG TIM
NHUỘM HEMATOXYLIN- EOSIN (HE) CÁC MẢNH CẮT MÔ
Quyết định số: 5199/QĐ-BYT
Ngày ban hành: 25/12/2013 12:00
Toàn văn
I. NGUYÊN LÝ
Đây là phương pháp nhuộm hai màu liên tiếp. Nhuộm nhân theo nguyên tắc tăng dần, nhuộm bào tương theo nguyên tắc giảm dần.
II. CHUẨN BỊ
1. Người thực hiện
Kỹ thuật viên giải phẫu bệnh - tế bào bệnh học: 02.
2.1. Phương tiện, hóa chất chung cho kỹ thuật
| - Dung dịch cố định bệnh phẩm. | - Bể nhuộm bằng thủy tinh. |
| - Cồn (70o, 80o, 95o, 100o). | - Bể thủy tinh đựng cồn, xylen. |
| - Xylen hay toluen. | - Hộp bằng thép không rỉ đựng parafin. |
| - Nước cất 2 lần. | - Khuôn nhựa. |
| - Parafin. | - Giá đựng tiêu bản (đứng và nằm ngang). |
| - Sáp ong. | - Cốc đong loại 1000ml, 500ml, 100ml và 50ml. |
| - Albumin + glyxerin. | - Ống hút bằng nhựa, quả bóp cao su hút hóa chất. |
| - Máy đo độ pH điện tử. | - Kẹp không mấu, kéo. |
| - Máy chuyển bệnh phẩm tự động. | - Cân phân tích. |
| - Máy đúc khối parafin. | - Giấy lọc. |
| - Bàn hơ dùng điện. | - Phiến kính, lá kính. |
| - Máy cắt lát mỏng (microtome). | - Axit picric ngâm, làm sạch phiến kính. |
| - Lưỡi dao cắt lát mỏng. | - Bôm Canada hoặc keo gắn lá kính. |
| - Lò nấu parafin. | - Kính hiển vi 2 mắt để kiểm tra kết quả nhuộm. |
| - Tủ ấm 37ovà 56o. | - Kính phòng hộ, găng tay các loại, mặt nạ phẫu thuật, áo choàng phẫu thuật. |
| - Tủ lạnh. | |
| - Điều hòa nhiệt độ. | |
| - Tủ hốt phòng thí nghiệm. | |
| - Nguồn cấp nước chảy. |
2.2. Phương tiện, hóa chất riêng biệt cho kỹ thuật
Phẩm nhuộm: Phẩm nhuộm nhân và bào tương có thể mua dạng thương mại, dùng luôn. Nếu không có sản phẩm dùng ngay, có thể pha phẩm nhuộm theo cách thức dưới đây:
a. Hematoxylin Harris :
- Hematoxylin (tinh thể) 1g
- Cồn (etanol) tuyệt đối 10ml
- Alun (ammonium hay potassium) 20g
- Nước cất 200ml
- Oxyt thuỷ ngân (đỏ) 0,5g
* Tiến hành pha:
1. Hòa tan hematoxylin trong cồn.
2. Hòa tan alun trong nước cất nóng. Đưa ra khỏi lửa và trộn hai dung dịch với nhau.
3. Đun sôi hỗn hợp, kéo bình đun ra khỏi lửa và thêm vào dần oxyt thuỷ ngân.
4. Đun nóng lại, khi hỗn hợp có màu tím sẫm, tắt lửa và nhúng ngay bình đun vào nước lạnh.
5. Khi bình đun lạnh hẳn, thêm 2ml axit acetic lạnh để làm tăng tính nhuộm nhân.
b. Eosine Y : ở Việt Nam thường pha dung dịch 0,5% trong cồn 95o.
L.G. Koss pha theo công thức:
| Eosine Y (CI. No45830) | 16g hoặc 1g |
| Dichromat kali | 8g hoặc 0,5g |
| Axit picric (nước bão hòa) | 160ml hoặc 10ml |
| Cồn etanol 95o | 160ml hoặc 10ml |
| Nước cất | 1280 ml hoặc 80ml |
- Hòa tan eosin và dichromat kali vào nước cất, đun nóng nếu cần, sau đó thêm dung dịch axit picric, cồn.
III. CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
1. Cố định: Bệnh phẩm lấy ra khỏi cơ thể được đưa ngay vào dung dịch cố định (formol đệm trung tính 10%) với tỷ lệ thể tích dung dịch cố định nhiều gấp 20-30 lần thể tích bệnh phẩm. Thời gian cố định từ 2-24 giờ tuỳ theo mảnh bệnh phẩm to hay nhỏ.
Sau khi cố định, bệnh phẩm được thực hiện qua các khâu kỹ thuật sau:
2. Chuyển bệnh phẩm
3. Vùi parafin
4. Đúc khối parafin
5. Cắt và dán mảnh cắt
6. Nhuộm
Thực hiện các bước sau:
- Tẩy parafin trong 3 bể toluen (hoặc xylen), mỗi bể 5 phút.
- Qua 4 bể cồn: 100º - 95º - 80º - 70º, mỗi bể nhúng 15 lần.
- Rửa nước cất: Nhúng 15 lần.
- Nhuộm nhân bằng Hematoxylin Harris: 3-5 phút hoặc lâu hơn.
- Rửa nước chảy: 5-10 phút.
- Kiểm tra màu của nhân qua kính hiển vi, nếu đậm, tẩy nhẹ bằng cồn-axit.
- Rửa nước chảy: 1phút.
- Nhuộm Eosin1% : 1 -2 phút.
- Rửa nước chảy: 1 phút.
- Biệt hoá trong 2 bể cồn 95º - 100º, mỗi bể 15 lần nhúng.
- Qua 3 bể toluen, bể I và II nhúng 15 lần, bể III: 5-10 phút.
- Gắn lá kính
IV. KẾT QUẢ
| Nhân tế bào | xanh đến xanh đen |
| Bào tương tế bào | hồng đến đỏ |
| Hồng cầu | hồng đậm |
| Sợi tạo keo | hồng nhạt. |
V. NHỮNG SAI SÓT VÀ HƯỚNG XỬ TRÍ
- Bào tương và nhân đều bắt màu nhạt: Thuốc nhuộm cũ, thay thuốc nhuộm mới.
- Nhân nhạt màu: Tăng thời gian nhuộm nhân.
- Nhân đậm màu quá mức: tẩy nhẹ bằng cồn-axit.