I. NGUYÊN LÝ

Thuật ngữ “nhuộm đa sắc” là tên gọi cho nhiều kỹ thuật nhằm phát hiện một cách chọn lọc thành phần cơ, sợi tạo keo, sợi tơ huyết và hồng cầu. Một trong 3 loại phẩm nhuộm của kỹ thuật này được dùng để nhuộm nhân tế bào.

II. CHUẨN BỊ

1. Người thực hiện

Kỹ thuật viên giải phẫu bệnh - tế bào bệnh học: 02.

2.1. Phương tiện, hóa chất chung cho kỹ thuật

2.2. Phương tiện, hóa chất riêng biệt cho kỹ thuật

Thuốc nhuộm ba màu được mua và/hoặc pha theo hướng dẫn ở III.6.1 dưới đây gồm thuốc nhuộm Hematoxylin ferric Weigert, axit periodic 1% (dung dịch nước), thuốc thử Schiff, dung dịch xanh lơ metyl (hoặc anilin), dung dịch nước bão hoà axit picric, xanh lơ metyl (hay Anilin).

III. CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH

1. Cố định

Bệnh phẩm lấy ra khỏi cơ thể được đưa ngay vào dung dịch cố định (formol đệm trung tính 10%) với tỷ lệ thể tích dung dịch cố định nhiều gấp 20-30 lần thể tích bệnh phẩm. Thời gian cố định từ 2-24 giờ tuỳ theo mảnh bệnh phẩm to hay nhỏ.

Sau khi cố định, bệnh phẩm được thực hiện qua các khâu kỹ thuật sau:

2. Chuyển bệnh phẩm

3. Vùi parafin

4. Đúc khối parafin

5. Cắt và dán mảnh cắt

6. Nhuộm mảnh cắt

6.1. Chuẩn bị thuốc nhuộm

* Pha chế thuốc thử Schiff

Để trong tủ 24 giờ, lọ đậy nút kín, dung dịch pha đậy sát miệng lọ. Sau 24 giờ, bảo quản ở tủ lạnh trong lọ có màu. Thuốc thử Schiff phải trong suốt và chỉ còn hơi ánh vàng. Nếu có màu hồng là bỏ đi. Có thể dùng được trong vài tháng.

Dung dịch xanh lơ metyl (hoặc anilin).

6.2. Các bước nhuộm mảnh cắt

- Tẩy parafin.

- Oxy hoá trong axit periodic 1% (dung dịch nước) trong 10 phút.

- Rửa nước chảy 15 phút.

- Ngâm trong thuốc thử Schiff: 10 phút đến 20 phút.

- Rửa nước chảy 15 phút.

- Nhuộm Hematoxylin ferric Weigert: 2 phút

- Rửa nước chảy 4 phút.

- Nhuộm xanh lơ metyl trong 6 phút.

- Biệt hoá và loại nước qua hai lần ngâm trong cồn 95% rồi hai lần ngâm trong cồn tuyệt đối (làm nhanh).

- Làm trong mảnh cắt qua 3 bể xylen sạch

- Gắn lá kính bằng bôm Canada.

IV. NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ