ĐỊNH LƯỢNG NGAL
Quyết định số: 320/QĐ-BYT
Ngày ban hành: 23/01/2014 12:00
Đại cương
Xét nghiệm NG L trong nước tiểu để định lượng lipocalin trung tính có liên hệ
với gelatinase trong nước tiểu người. NG L là một trong những protein được sản sinh
trong thận sau chứng thiếu máu cục bộ hay ngộ độc thận.
Xét nghiệm định lượng NG L trong nước tiểu là xét nghiệm miễn dịch hai bước
sử dụng phép phân tích miễn dịch Vi hạt hóa phát quang CMI (Chemiluminescent
MicropartiCloe Immuno ssay) với quy trình xét nghiệm linh hoạt để định lượng
NG L trong nước tiểu người. Bước 1: mẫu thử và dung dịch đệm được kết hợp với
nhau tạo độ pha loãng mẫu tỉ lệ 1:10. Mẫu đã pha loãng với dung dịch đệm và vi hạt
thuận từ phủ anti-NG L được kết hợp lại. NG L có trong mẫu thử liên kết với antiNG L phủ trên vi hạt thuận từ, rửa hỗn hợp phản ứng. Sau đó anti-NG L có đánh
dấu acridinium được cho vào ở bước hai.Tiếp theo một quá trình rửa khác, cho dung
dịch Pre-Trigger và Trigger vào hỗn hợp phản ứng. Kết quả của phản ứng hóa phát
quang được tính bằng đơn vị ánh sáng (RLUs). Sự tương quan trực tiếp giữa lượng
NG L trong mẫu và RLUs sẽ được bộ phận quang học trong máy RCHITECT phát
hiện.
Chuẩn bị
1. Người thực hiện
Bác sĩ và Cử nhân XN được đào tạo vận hành máy rchitect
2. Phương tiện, hóa chất
2.1. Phương tiện:
- Máy Architect ir1000
- Ống hay lọ sạch dùng để lấy nước tiểu.
2.2. Hóa chất:
Bộ thuốc thử, 100 test/500 test RCHITECT N GL
- Các vi hạt: 1 chai (6,6 mL / 27,0 mL) nti-NG L (chuột, kháng thể đơn dòng) phủ
trên vi hạt trong dung dịch đệm TRIS với chất ổn định và tẩy protein (từ bò). Nồng độ
tối thiểu: 0,08% rắn. Chất bảo quản: ProCloin 300
- Chất kết hợp: 1 chai (5,9 mL / 26,3 mL) nti-NG L (chuột, kháng thể đơn dòng)
chất kết hợp có đánh dấu acridinium trong dung dịch đệm TRIS với chất ổn định và
tẩy protein (từ bò). Nồng độ tối thiểu: 200 ng/mL.
3. Người bệnh: Những người bệnh nghi ngờ suy thận cấp
4. Phiếu xét nghiệm: Thống nhất theo mẫu quy định của bệnh viện và của Bộ Y tế
Các bước tiến hành
1. Lấy bệnh phẩm
- Loại mẫu dùng cho xét nghiệm RCHITECT Urine NG L chỉ là mẫu nước tiểu
người. Lấy mẫu nước tiểu bất kỳ.
- Điều kiện mẫu: Không sử dụng mẫu có tạp chất, nhiễm khuẩn, nhiễm nấm thấy
bằng mắt thường. Không dùng cho tử thi hay dịch cơ thể.
- Chuẩn bị phân tích: Ngay khi lấy mẫu trong vòng 24giờ, mẫu phải chuyển sang
ống ly tâm và ly tâm ở ≥ 400 RCF (Relative Centrifugal Force) tối thiểu trong 5 phút.
Sau đó hút phần dịch trong sang cốc đựng mẫu hay ống tuýp thứ hai để chạy xét
nghiệm và/hoặc để lưu.
- Bảo quản:
Mẫu bảo quản 24h ở nhiệt độ phòng (22-30°C) hay 7 ngày ở 2-8°C. Nếu chưa thực
hiện xét nghiệm, mẫu nên để đông lạnh ≤ -70°C
2. Tiến hành kỹ thuật
- Lắc đảo ngược chai vi hạt 30 lần để phân tán các vi hạt có thể bị lắng trong quá
trình vận chuyển. Nạp Bộ thuốc thử RCHITECT NG L vào hệ thống RCHITECT
ir1000.
- Kiểm tra để chắc rằng có đủ tất cả thuốc thử cần thiết cho xét nghiệm.
- Đảm bảo rằng các chai thuốc thử đã mở nắp đều có màng ngăn đậy lại.
- Tiến hành hiệu chuẩn nếu cần.
Chuẩn bị mẫu chuẩn và mẫu kiểm tra chất lượng.
- Lắc trộn chai đựng mẫu chuẩn và mẫu kiểm tra chất lượng NG L RCHITECT
nhẹ nhàng trước khi sử dụng.
- Yêu cầu chai đựng mẫu chuẩn và mẫu kiểm tra chất lượng NG L phải giữ theo
chiều thẳng đứng và nhỏ 5 giọt mẫu chuẩn hay 5 giọt của mỗi mẫu kiểm tra chất
lượng vào từng cup đựng mẫu tương ứng. Sau đó nạp mẫu và nhấn nút RUN.
Quy trình pha loãng mẫu: Mẫu với nồng độ NG L nước tiểu > 1500 ng/mL được
đánh dấu (flag) có thể được pha loãng bằng quy trình pha loãng tự động. Người vận
hành sẽ đặt lệnh pha loãng theo tỉ lệ 1:4 cho mẫu, máy tự động tính toán nồng độ của
mẫu và báo cáo kết quả.
Tai biến và xử trí
- Thận trọng khi xử lý các mẫu xét nghiệm của người bệnh để ngăn ngừa nhiễm
chéo. Nên sử dụng pipet dùng một lần hay pipet có đầu côn.
- Nếu mẫu được bảo quản, trộn tất cả các mẫu ở nhiệt độ thấp hoặc lắc đảo ngược
10 lần. Quan sát mẫu bằng mắt thường cho đến khi mẫu không còn bị phân lớp. Nếu
chưa được, tiếp tục thực hiện lắc trộn mẫu cho đến khi mẫu đồng nhất. Ly tâm theo
hướng dẫn ở trên trước khi thực hiện xét nghiệm để tránh sai sót.