Cholesterol ester có trong dịch chọ dò được chuyển thành cholesteron và H2O2 do các enzym cholesterol esterase xúc tác. Sau đó cholesteron bị oxy hoá tạo thành H2O2 và cholestentrione . H2O2 kết hợp với chất hiện màu nhờ tác dụng của enzym perosidase để chuyển thành hợp chất có màu đỉnh hấp thụ cực đại ở 532 nm.

Cholesterolesterase

Cholesterol esters                     Cholesterol + acid béo tự do Cholesterol oxidase

Cholesterol + O2                       4 Cholesten-3-one + H2O2 POD

2H2O2 + phenol + 4 Amino antipyrin     Quinoneimin + 4 H2O

Người thựchiện

Bác sĩ hoặc kỹ thuật viên được đào tạo về chuyên nhành xét nghiệm Hóa sinh.

Phương tiện, hóa chất

Máy xét nghiệm bán tự động H5000, 4010, evolution…

Máy tự động hoàn toàn U 400, 640, 2700 (hãng Beckman coulter). Kit của hãng Beckman coulter.

R1: Buffer (dung dịch đệm)

Phosphate buffer (pH = 6.5), Chloro - 4 - phenol Sodium Cholate, Triton

R2: Enzyme

Cholesterol oxydase (CO) Cholesterol esterase (CE) Peroxidase (POD)

4 - amino - antipyrin (PAP) R3: Standard

Cholesterol 200 mg/dL (5,17 mmol/l).

Người bệnh

Người bệnh cần được tư vấn trước khi làm xét nghiệm.

Phiếu xét nghiệm

Phiếu xét nghiệm cần ghi đầy đủ các thủ tục hành chính: họ tên người bệnh, tuổi, mã số người bệnh, khoa phòng, tên xét nghiệm chỉ định, khoảng tham chiếu, bác sĩ chỉ định xét nghiệm, ngày giờ lấy mẫu, người lấy mẫu, ngày giờ nhận mẫu bệnh phẩm, người nhận mẫu.

Ghi yêu cầu xét nghiệm: Định lượng nồng độ cholesterol.

Lấy bệnh phẩm

Dịch chọc dò

Tiến hành kỹ thuật

Cho vào 3 ống nghiệm

Lắc đều, ủ 370C trong 5 phút hoặc 10 phút ở nhiệt độ phòng. Đo mật độ quang học ở bước sóng = 500 nm (480 – 520 nm) so với ống chuẩn để tính kết quả.

Tính kết quả: Nồng độ ống mẫu :

CU= ODU/ ODS * CS (mg/dL hoặc mmol/l) ODU là mật độ hấp thu của ống mẫu

ODS là mật độ hấp thu của ống chuẩn CU là nồng độ Cholesterol mẫu

CS là nồng độ Cholesterol chuẩn