Các bài viết liên quan
- GHÉP TẾ BÀO GỐC TẠO MÁU ĐỒNG LOẠI
- GHÉP TẾ BÀO GỐC TẠO MÁU TỰ THÂN
- CHỌC TỦY SỐNG TIÊM HÓA CHẤT NỘI TỦY
- CHỌC TỦY SỐNG LẤY DỊCH NÃO TỦY XÉT NGHIỆM
- RÚT MÁU
- TRUYỀN MÁU TẠI GIƯỜNG BỆNH
- QUY TRÌNH TRUYỀN HÓA CHẤT ĐƢỜNG TĨNH MẠCH
- QUY TRÌNH GẠN TIỂU CẦU ĐIỀU TRỊ
- QUY TRÌNH GẠN BẠCH CẦU ĐIỀU TRỊ
- TRAO ĐỔI HUYẾT TƯƠNG
ĐÁNH GIÁ TỶ LỆ SỐNG CỦA TẾ BÀO BẰNG KỸ THUẬT NHUỘM XANH TRYPAN
Quyết định số: 2017/QĐ-BYT
Ngày ban hành: 09/06/2014 12:00
Đại cương
Các tế bào chết sẽ bắt màu khi nhuộm xanh trypan và các tế bào sống sẽ
không bắt màu. Thông qua đếm số lượng tế bào không bắt màu và bắt màu sau
khi nhuộm để tính tỷ lệ sống của tế bào.
Nguồn gốc kỹ thuật: Áp dụng theo quy trình kỹ thuật của AABB
Chỉ định điều trị
- Máu dây rốn;
- Tế bào gốc máu ngoại vi;
- Dịch tủy xương.
Chống chỉ định
Không có chống chỉ định.
Chuẩn bị
1. Ngƣời thực hiện:
Người thực hiện: được đào tạo phù hợp để thực hiện kỹ thuật.
2. Phƣơng tiện – Hóa chất:
2.1. Phương tiện:
- Kính hiển vi quang học vật kính 10X và 40X;
- Máy đếm tế bào huyết học.
- Buồng đếm hồng cầu; lamen;
- Ống eppendorf;
- Pipet các cỡ để hút được 2l, 10l, từ 20 đến 100l;
- Đầu côn vàng.
2.2. Hóa chất:
- Cồn 70o, nước muối;
- Dung dịch thuốc nhuộm xanh trypan 0,4%.
3. Mẫu bệnh phẩm
Mẫu máu dây rốn, dịch tủy xương, tế bào gốc máu ngoại vi.
Các bước tiến hành
1. Tổng phân tích tế bào máu;
2. Chuẩn bị kính hiển vi, buồng đếm gắn sẵn lamen;
363
3. Pha loãng mẫu với dung dịch nước muối sinh lý, dựa trên số lượng
bạch cầu đo được đảm bảo mật độ tế bào khoảng 500 tế bào/l là phù hợp;
4. Nhuộm với dung dịch xanh trypan theo tỷ lệ 1:1 vể thể tích;
5. Nhỏ 10l tế bào đã nhuộm vào mép lamen để dịch mao dẫn vào trong
buồng đếm;
6. Đọc kết quả ở vật kính 40X;
7. Đưa vi trường theo đường zíc-zắc để tránh đếm lặp lại các tế bào, đếm
số tế bào sống và tế bào chết trong đó các tế bào chết là tế bào bị nhuộm màu
xanh. Đếm tổng số ít nhất 200 tế bào.
8. Tính tỷ lệ tế bào sống:
Số tế bào sống
Tỷ lệ tế bào sống = x 100%
Tổng số tế bào đếm được
9. Ghi lại kết quả và hoàn thiện hồ sơ.
Tài liệu tham khảo
1. Nicholas Greco, Lynn O’Donnel. Determining cellular viability using
Trypan blue. Cellular Therapy: Principle, Method and Regulation, Bethesda,
MD:AABB, 2009, chapter 47, Method 47-1. p.565-566.