Hệ thống thông tin Sức khỏe Việt

Phát hiện interferon γ do các tế bào miễn dịch tạo ra khi bị kích thích bởi các mycobacterial peptides (ESAT-6, CFP-10 và TB7.7(p4)) dựa trên nguyên lý của kỹ thuật ELISA.

Chuẩn bị

1. Người thực hiện:

- Người thực hiện: Người thực hiện đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng nhận về chuyên ngành xét nghiệm.

- Người nhận định và phê duyệt kết quả: Người thực hiện có trình độ đại học hoặc sau đại học về chuyên ngành xét nghiệm.

2. Phương tiện, hóa chất (Ví dụ hoặc tương đương)

2.1. Trang thiết bị

- Tủ ấm thường

- Dàn máy ELISA

- Máy ly tâm thường

- Máy lắc phiến nhựa

- Máy Vortex

- Máy đọc phiến nhựa bước sóng 450 nm và 620 - 650 nm

- T lạnh 2°C - 8°C

- Micropipette đơn kênh thể tích từ 10 µl đến 1000 µl.

- Bộ micropipette 8 kênh thể tích từ 50 µl đến 200 µl

2.2. Dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm)

STT	Chi phí hóa chất, vật tư tiêu hao	Đơn vị
1	Bông	Kg
2	Dây garô	Cái
3	Cồn	mL
4	Bơm kim tiêm	Cái
5	Panh	Cái
6	Khay đựng bệnh phẩm	Cái
7	Hộp vận chuyển bệnh phẩm	Cái
8	Tube đựng bệnh phẩm	Cái
9	Sinh phẩm chẩn đoán	Test
10	Khấu hao sinh phẩm cho chạy chứng, kiểm chất lượng	Test
11	Chứng ngoại kiểm âm (nếu có)	Ml
12	Chứng ngoại kiểm dương (nếu có)	Ml
13	Ngoại kiểm (EQAS) (nếu có)*
14	Nước cất	Ml
15	Đầu côn 1000 µl	Cái
16	Đầu côn 200 µl	Cái
17	Giấy thấm	Cuộn
18	Giấy xét nghiệm	Tờ
19	Sổ lưu kết quả xét nghiệm	Tờ
20	Bút viết kính	Cái
21	Bút bi	Cái
22	Mũ	Cái
23	Khẩu trang	Cái
24	Găng tay	Đôi
25	Găng tay xử lý dụng cụ	Đôi
26	Quần áo bảo hộ	Bộ
27	Dung dịch xà phòng rửa tay	Ml
28	Cồn sát trùng tay nhanh	Ml
29	Dung dịch khử trùng	Ml
30	Khăn lau tay	Cái

* Ghi chú: Chi phí ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình ngoại kiểm (EQAS) là 1/50 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lần ngoại kiểm trung bình 4 lần/1 năm).

3. Bệnh phẩm

Máu toàn phần 4 ml lấy vào 4 ống, mỗi ống 1 ml theo hướng dẫn của nhà sản xuất.

4. Phiếu xét nghiệm

Điền đầy đủ thông tin theo mẫu yêu cầu

Các bước tiến hành

Các bước tiến hành thực hiện theo phương tiện, hóa chất được ví dụ trên.

1. Lấy bệnh phẩm

- Lấy 1mL máu tĩnh mạch vào trong mỗi ống QFT (4 ống).

- Sau khi lấy máu xong, lập tức lắc các ống khoảng 10 lần vừa đủ mạnh để đảm bảo toàn bộ bề mặt bên trong của ống được phủ máu (để hòa tan) toàn bộ các kháng nguyên trên thành ống.

- Chuyển các ống tới phòng xét nghiệm nhiệt độ 17 – 27°C.

Máu phải được ủ ấm nhiệt độ 37°C càng sớm càng tốt (và trong vòng 16 giờ sau khi lấy máu)

2. Tiến hành kỹ thuật

Bộ sinh phẩm QuantiFERON®-TB Gold (QFT®) plus (VD hoặc bộ sinh phẩm tương đương)

Các bước	Nội dung
2.1	Máu phải được ủ ấm càng sớm càng tốt (trong vòng 16 giờ sau khi lấy máu) Ủ ấm các ống vị trí đặt thẳng đứng 37°C trong 16 - 24 giờ. Không cần điều kiện độ ẩm/CO2.
2.2	Ly tâm các tube 2000-3000g (RCF) trong thời gian 15 phút.
2.3	Tách huyết tương - Các mẫu Huyết tương nên chỉ được thu bằng pipette - Các mẫu huyết tương có thể được lấy trực tiếp từ các ống QFT đã ly tâm vào các giếng ELISA, bao gồm cả khi sử dụng dàn ELISA tự động. - Các mẫu huyết tương đã tách có thể được bảo quản trong 28 ngày nhiệt độ 2-8°C, dưới -20°C trong thời gian dài hơn.
2.4	Đánh số, sắp xếp bệnh phẩm và viết sơ đồ theo thứ tự.
2.5	Chuẩn bị hóa chất ELISA Hiệu chỉnh Lọ Standard và Conjugate
2.6	Vẽ sơ đồ tthực hiện
2.7	Chuẩn bị dung dịch Standard và dung dịch Working Strength
2.8	Chuẩn bị số Trip trên đĩa ELISA đủ cho số lượng mẫu
2.9	Lấy 50µL dung dịch working strength vào mỗi giếng ELISA Lấy 50µL huyết tương vào các giếng ELISA mẫu (trừ các giếng S1,S2,S3,S4) Lấy 50µL dung dịch S1, S2, S3, S4 theo thứ tự đã ghi ở sơ đồ
2.10	Lắc đĩa trong thời gian 1 phút Ủ ở nhiệt độ phòng trong thời gian 2 giờ (Cần bọc đia ELISA để tránh tiếp xúc ánh sáng trực tiếp.
2.11	Chuẩn bị dịch rửa
2.12	Hút 100µL dung dịch Substrate vào mỗi giếng Phủ kín và ủ ở nhiệt độ phòng trong thời gian 30 phút Cho tiếp 50µL dung dịch stopping solution vào mỗi giếng và lắc
2.13	Đo OD ở bước sóng 450nm và tham chiếu bước sóng 620nm trong vòng 5 phút khi dừng phản ứng
2.14	Sử dụng phần mềm QFT 2.7.1 để phân tích kết quả

Tai biến và xử trí

1. Sai sót

Kết quả không xác định hoặc không tin cậy có thể do:

- Thực hiện sai các bước trong quy trình hướng dẫn.

- Mẫu từ lúc lấy đến lúc được ủ ở 37ºC lâu hơn 16 tiếng.

- Lượng interferon γ quá nhi u heterophile antibody.

2. Xử trí

- Tuân thủ đúng các bước qui trình hướng dẫn của nhà sản xuất và hướng dẫn về độ ổn định hóa chất xét nghiệm trong bộ sinh phẩm sử dụng.