1. Mục đích

Phát hiện DNA đặc trưng của Helicobacter pylori từ mảnh sinh thiết dạ dày.

2. Nguyên lý

Dựa trên nguyên lý của kỹ thuật Real-time PCR.

1. Người thực hiện

- Người thực hiện: Nhân viên xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng nhận về chuyên ngành Vi sinh (và/hoặc sinh học phân tử/ sinh học/công nghệ sinh học).

- Người nhận định và phê duyệt kết quả: Người thực hiện có trình độ đại học hoặc sau đại học về chuyên ngành Vi sinh (và/hoặc sinh học phân tử/ sinh học/công nghệ sinh học).

2. Phương tiện, hóa chất (Ví dụ hoặc tương đương)

2.1. Trang thiết bị

• Máy real-time PCR và hệ thống máy vi tính

• Bộ lưu điện

• Tủ an toàn sinh học cấp 2

• Máy ly tâm dùng cho tube 0,2ml

• Máy ly tâm > 12000 gpm/phút

• Máy ủ nhiệt

• Máy vortex

• Chày cối nghiền

• Tủ lạnh 2°C - 8°C

• Tủ âm sâu (-20°C) hoặc (-70°C)

• Micropipettes các thể tích từ 5-1000µl

2.2. Dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm)

* Ghi chú:

- Chi phí ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình ngoại kiểm (EQAS) là 1/50 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lần ngoại kiểm trung bình 3 lần/1 năm).

3. Bệnh phẩm

Mảnh sinh thiết dạ dày.

4. Phiếu xét nghiệm

Điền đầy đủ thông tin theo mẫu yêu cầu

Các bước tiến hành thực hiện theo phương tiện, hóa chất được ví dụ trên.

1. Lấy bệnh phẩm

- Lấy qua ống nội soi đường miệng

- Quan sát thấy ổ loét, lấy 4 mẫu (3 mẫu các góc tổn thương loét, lấy vùng mép (ranh giới) của tổn thương và một mảnh ở trung tâm) hoặc lấy các vị trí có tổn thương nghi ngờ do H. pylori (trợt, niêm mạc sần,...)

- Dùng kim lấy máu chuyển bệnh phẩm từ kim sinh thiết vào lọ đựng bệnh phẩm.

2. Tiến hành kỹ thuật:

Bộ sinh phẩm H. pylori Real-TM (Sacace -VD hoặc tương đương)

2.1. Thu nhận và xử lý mẫu

2.2. Tách chiết DNA

2.3. Thực hiện phản ứng real-time PCR

Nếu đường đồ thị huỳnh quang của mẫu xuất hiện ngoài chu kỳ thứ 40 thì phải cẩn thận kiểm tra và đánh giá lại mẫu.