Kháng thể kháng HLA có thể hình thành trong cơ thể người bệnh do đã

được tiếp xúc với kháng nguyên trước.

Huyết thanh của người bệnh được ủ với một phiến phản ứng gồm nhiều

giếng, các giếng đó được phủ các loại kháng nguyên hệ HLA khác nhau. Nếu có

phản ứng kháng nguyên-kháng thể đặc hiệu xảy ra, kháng thể đó sẽ được phát

hiện bằng hệ thống kháng thể thứ hai kháng IgG người vì hệ thống phát hiện bao

gồm có cơ chất tạo màu và enzym xúc tác (theo nguyên lý ELISA). Nếu phản

ứng tạo màu xảy ra ở giếng nào (có màu xuất hiện) thì chứng tỏ trong huyết

thanh người bệnh có kháng thể đặc hiệu phản ứng với một hoặc một vài kháng

nguyên có trong giếng đó. Xét nghiệm này thường được chỉ định để phát hiện

kháng thể kháng HLA bất thường trước ghép, hoặc để kiểm tra đánh giá sự hình

thành của kháng thể kháng HLA sau ghép.

Các trường hợp chuẩn bị ghép đồng loại.

Không có chống chỉ định.

1. Ngƣời thực hiện

- Kỹ thuật viên và cử nhân xét nghiệm được đào tạo thực hiện kỹ thuật;

- Bác sĩ: đọc kết quả, đánh giá, kiểm tra chất lượng.

2. Phƣơng tiện - Hóa chất

2.1. Phương tiện

- Máy đọc ELISA vi giếng (đọc được phiến Terasaki);

- Bộ pipet man 10, 20, 200, và 1000 µl;

- Máy ly tâm ống máu;

- Que thủy tinh.

- Găng tay, giấy thấm.

2.2. Hóa chất

- Bộ kít tiền mẫn cảm bao gồm:

+ Dung dịch rửa;129

+ Dung dịch pha loãng mẫu;

+ Huyết thanh chứng dương;

+ Dung dịch cộng hợp;

+ Dung dịch cơ chất tạo màu;

+ Dung dịch ngưng phản ứng;

+ Phiến nhựa vi giếng có gắn sẵn các hỗn hợp kháng nguyên hệ HLA.

(thường hãng sản xuất cung cấp tài liệu dạng sơ đồ cho biết kháng nguyên trong

có từng giếng).

- Nước cất, hoá chất khử trùng Natri hypoclorite.

3. Mẫu bệnh phẩm

- Mẫu dùng là mẫu huyết thanh tách từ máu không chống đông.

- Mẫu cho xét nghiệm có thể bảo quản 7 ngày ở nhiệt độ 2-8oC. Muốn bảo

quản lâu hơn, mẫu huyết thanh phải được giữ âm sâu (≤ -20oC).

1. Chuẩn bị mẫu

- Lấy 2ml máu ngoại vi vào ống nghiệm không chống đông, ghi rõ thông tin

người bệnh: tên, tuổi, số giường, khoa phòng, đúng với thông tin trên phiếu chỉ

định.

- Tách huyết thanh: để mẫu đông tự nhiên. Dùng que thủy tinh tách lớp

huyết thanh đông khỏi thành ống.

- Ly tâm ống máu đông 2000 vòng/phút trong 3 phút, sẽ thu được lớp

huyết thanh màu vàng nổi lên phía trên.

- Pha loãng huyết thanh người bệnh bằng dung dịch pha loãng mẫu theo

hướng dẫn của nhà sản xuất kít.

2. Chuẩn bị hóa chất

- Đưa hóa chất ra nhiệt độ phòng, pha dung dịch rửa, huyết thanh chứng,

cộng hợp, và cơ chất tạo mầu về nồng độ phản ứng theo hướng dẫn của nhà sản

xuất.

3. Tiến hành xét nghiệm

- Đưa phiến phản ứng ra nhiệt độ phòng 15 phút.

- Nhỏ bệnh phẩm, dung dịch pha loãng kháng thể (giếng blank), và huyết

thanh chứng vào các vị trí đã quy định trên phiến (theo hướng dẫn của nhà sản

xuất).

- Ủ 1 giờ ở nhiệt độ phòng.130

- Rửa 3 lần bằng dung dịch rửa, 20 uL/giếng, mỗi lần để 2 phút.

- Nhỏ 10 uL cộng hợp vào mỗi giếng, ủ 40 phút.

- Rửa 2 lần bằng dung dịch rửa, 20 uL/giếng, mỗi lần để 2 phút.

- Nhỏ 10 uL Substrate vào mỗi giếng, ủ 15 phút.

- Nhỏ 10 uL dung dịch ngưng phản ứng vào mỗi giếng. Đọc kết quả trên

máy đo ELISA dùng cho phiến Terasaki, dùng phần mềm của hãng sản xuất kít.

Kết quả được xuất dưới dạng các giếng âm tính và dương tính.

- Sai sót mẫu bệnh phẩm: tên bệnh nhân trên giấy xét nghiệm và trên ống

mẫu không thống nhất, mẫu bị đông, mẫu không ghi giờ lấy.

Xử trí: yêu cầu nơi đưa mẫu xác minh lại các thông tin cần thiết, nếu mẫu

bị đông hoặc đã để quá lâu thì phải lấy lại mẫu bệnh phẩm.

- Các mẫu chứng dương lại âm tính dương hoặc mẫu chứng âm lại dương

tính. Thường do hóa chất hết hạn hoặc do chuẩn bị hóa chất sai.

Xử trí: kiểm tra hạn sử dụng của hóa chất, không dùng hóa chất hết hạn.

Làm lại xét nghiệm và tuân thủ đúng các bước trong quy trình.

One Lambda, 2010. Lamda Antigen Tray Class I and Class II 88 antigen

panel. User manual.