ARN thông tin quy định các thông tin về axit amin và nằm trong tế bào
chất của tế bào. Để tách được ARN người ta thường sử dụng các chất tẩy mạnh
để phá màng tế bào, kết hợp với sử dụng các chất biến tính mạnh để loại bỏ các
protein sau đó sử dụng cồn 960 kết hợp với điều kiện nhiệt độ thấp để thu được
ARN một cách tinh sạch và nguyên vẹn. 
 

Sử dụng cho tất cả người bệnh có chỉ định làm xét nghiệm RT-PCR/qRTPCR. 
 

Không có chống chỉ định. 
 

1. Ngƣời thực hiện
- Kỹ thuật viên xét nghiệm sinh học phân tử đã được đào tạo;
- Tất cả các mẫu bệnh phẩm có chỉ định xét nghiệm RT-PCR hoặc qRTPCR.
2. Phƣơng tiện - Hóa chất
2.1. Phương tiện
- Tủ hút hóa chất (chemical fume hood);
- Buồng vô trùng (biology cabinet);
- Máy ly tâm tốc độ cao (tốc độ tối đa 14.000 vòng/phút);
- Máy vortex;
- Các loại pipet 10 µl, 20 µl, 100 µl, 200 µl, 1000 µl;
- Đầu côn có màng lọc;
- Ống eppendorf 1,5 ml vô trùng, không có enzym nucleaza;
- Ống PCR 0,2 ml vô trùng, không có enzym nucleaza;
- Tủ lạnh 4-80C, tủ âm sâu -200C;
- Găng tay.
2.2. Hóa chất
171
Sử dụng kit tách ARN thương mại. Nếu tách thủ công thì sử dụng các sinh
phẩm cần thiết để tách chiết ARN như glycogen, proteinase K, đệm ly giải tế
bào, phenol/chloroform, cồn tuyệt đối. 
 

1. Lấy bệnh phẩm
2 ml máu ngoại vi hoặc dịch tủy xương chống đông bằng EDTA.
2. Tiến hành kỹ thuật
Phương pháp tách chiết ARN cơ bản bao gồm các giai đoạn chính sau:
2.1.Loại bỏ các tế bào hồng cầu
ARN nằm ở tế bào chất bên trong các tế bào có nhân. Vì vậy thông
thường bệnh phẩm sẽ được xử lý trước để loại bỏ bớt các tế bào hồng cầu. Để
loại bỏ các tế bào hồng cầu có thể sử dụng dung dịch Ficoll (có tỷ trọng 1.077)
để phân lớp các tế bào theo tỷ trọng hoặc sử dụng một số dung dịch ly giải hồng
cầu (như dung dich gồm 1M MgCl2, 5M NaCl, 1M Tris-HCl). Sau khi loại bỏ
bớt các tế bào hồng cầu, dung dịch còn lại chứa chủ yếu các tế bào có nhân sẽ
được sử dụng để tách ARN.
2.2. Phá màng tế bào và màng nhân:
Các tế bào có nhân được ủ trong một dung dịch gồm chất tẩy mạnh (như
SDS, sarcosyl), một chất gây biến tính protein mạnh như (guanidinium
thyocianat), một chất khử (2-mercaptoethanol). Mục tiêu của bước ủ này là để
phá màng tế bào đồng thời để ức chế hoạt động của các enzym phân hủy ARN
nội bào (ARNaza) và tách các protein lên kết khỏi phân tử ARN.
2.3.Loại bỏ các protein:
Sử dụng dung dịch phenol/chloroform để biến tính protein, làm cho
protein tạo thành một lớp tủa rõ rệt sau khi ly tâm, dễ dàng loại bỏ khỏi hỗn dịch
2.4.Kết tủa ARN:
Sử dụng cồn tuyệt đối để tủa ARN trong điều kiện đông lạnh và thu nhận
lại ARN bằng ly tâm. ARN cần phải hòa lại trong nước khử enzym nucleaza. 
 

1. Hồ Huỳnh Thuỳ Dương (1997). Các phương pháp tách chiết axit
nucleic. Sinh học phân tử. NXB Giáo Dục, trang 124-125.
2. A.Rolfs et at (1992). PCR:Clinical Diagnosis and Research. Springer Verlag,
Berlin.