Tra cứu  ›  QTKT khám-chữa bệnh  ›  TÁCH CHIẾT ADN TỪ MÁU NGOẠI VI/MÁU CUỐNG RỐN

TÁCH CHIẾT ADN TỪ MÁU NGOẠI VI/MÁU CUỐNG RỐN

Quyết định số: 2017/QĐ-BYT

Ngày ban hành: 09/06/2014 12:00

Đại cương

Các tế bào có nhân đều chứa ADN - vật chất di truyền của toàn bộ cơ thể.
ADN nằm trên nhiễm sắc thể bên trong nhân tế bào. Để tách được ADN người ta
thường sử dụng các chất tẩy mạnh để phá màng tế bào và màng nhân, kết hợp với
sử dụng các chất biến tính mạnh để loại bỏ các protein sau đó sử dụng cồn 96o kết
hợp với điều kiện nhiệt độ thấp để thu được ADN một cách tinh sạch và nguyên
vẹn. 
 

Chỉ định điều trị

Sử dụng cho tất cả người bệnh có chỉ định làm xét nghiệm PCR. 
 

Chống chỉ định

Không có chống chỉ định. 
 

Chuẩn bị

1. Ngƣời thực hiện
- Kỹ thuật viên xét nghiệm Sinh học phân tử đã được đào tạo.
2. Phƣơng tiện - Hóa chất
2.1. Phương tiện
- Buồng vô trùng (biology cabinet);
- Máy ly tâm tốc độ cao (tốc độ tối đa 14.000 vòng/phút);
- Máy vortex;
- Các loại pipet 10 µl, 20 µl, 100 µl, 200 µl, 1000 µl;
- Đầu côn có màng lọc;
- Ống eppendorf 1,5 ml vô trùng, không có enzym nucleaza;
- Ống PCR 0,2 ml vô trùng, không có enzym nucleaza;
- Tủ lạnh 4-80C, tủ âm sâu -200C;
- Găng tay.
2.2. Hóa chất
Sử dụng kit tách ADN thương mại. Nếu tách thủ công thì sử dụng các
sinh phẩm cần thiết để tách chiết ADN như proteinase K, đệm ly giải tế bào,
phenol/chloroform, cồn tuyệt đối.
3. Bệnh phẩm
2 ml máu ngoại vi/máu cuống rốn chống đông bằng EDTA. 
 

Các bước tiến hành

1. Lấy bệnh phẩm
2 ml máu ngoại vi/máu cuống rốn chống đông bằng EDTA.
2. Tiến hành kỹ thuật
Phương pháp tách chiết ADN cơ bản bao gồm các giai đoạn chính sau:
Phá màng tế bào và màng nhân:
Bệnh phẩm được ủ trong một dung dịch gồm chất tẩy mạnh (như SDS,
sarcosyl) và enzym phân hủy protein (proteinaza K). Mục tiêu của bước ủ này là
để phá màng tế bào và màng nhân đồng thời để ức chế hoạt động của các enzym
ADNaza nội bào và tách protein ra khỏi các phân tử ADN.
Loại bỏ các protein:
Sử dụng dung dịch phenol/chloroform để biến tính protein, làm cho
protein tạo thành một lớp tủa rõ rệt sau khi ly tâm, dễ dàng loại bỏ khỏi hỗn
dịch.
Kết tủa ADN:
Sử dụng cồn để tủa ADN trong điều kiện lạnh và thu nhận lại ADN bằng
ly tâm. ADN cần phải hòa lại trong nước khử enzym nucleaza. 
 

Tai biến và xử trí

 Lấy mẫu không đủ hoặc sai chất
chống đông.
 Thực hiện theo đúng hướng dẫn qui cách
lấy mẫu.
 Thao tác pipet không chính xác. Sử dụng pipet theo đúng thể tích quy
định.
 Tín hiệu phản ứng không rõ ràng. Bảo quản hóa chất đúng theo khuyến cáo
của nhà sản xuất
 Thực hiện đúng, đủ các bước trong quy
trình xét nghiệm.


 

Tài liệu tham khảo

1. Hồ Huỳnh Thuỳ Dương (1997). Các phương pháp tách chiết axit
nucleic. Sinh học phân tử. NXB Giáo Dục, trang 124-125.
2. A.Rolfs et at (1992). PCR:Clinical Diagnosis and Research. Springer Verlag,
Berlin.